安益譜 Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)：參照 GB/T 22959-2008 外標(biāo)法定量檢測(cè)三種氯霉素藥物的方法建立
氯霉素類(lèi)藥物（如氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考）作為廣譜抗生素，曾廣泛應(yīng)用于畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，用于防治細(xì)菌感染性疾病。但此類(lèi)藥物在動(dòng)物源性食品中若存在殘留，可能通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，引發(fā)再生障礙性貧血、灰嬰綜合征等健康風(fēng)險(xiǎn)，因此國(guó)內(nèi)外均對(duì)其殘留量制定了嚴(yán)格限量標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 22959-2008《河豚魚(yú)、鰻魚(yú)和烤鰻中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法》作為國(guó)內(nèi)動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留檢測(cè)的核心標(biāo)準(zhǔn)，為檢測(cè)方法的建立提供了權(quán)威依據(jù)。
安益譜 Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）系統(tǒng)憑借 “超高效分離 + 高靈敏度檢測(cè)” 的核心性能，結(jié)合 GB/T 22959-2008 標(biāo)準(zhǔn)要求，采用外標(biāo)法定量，成功建立了同時(shí)檢測(cè)氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考三種藥物的分析方法。該方法不僅滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確性的要求，更通過(guò)儀器性能優(yōu)化，大幅提升了檢測(cè)效率，為動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留管控提供了可靠技術(shù)支撐。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
一、方法建立背景與檢測(cè)目標(biāo)
GB/T 22959-2008 標(biāo)準(zhǔn)主要針對(duì)河豚魚(yú)、鰻魚(yú)、烤鰻等水產(chǎn)樣品中三種氯霉素類(lèi)藥物殘留檢測(cè)，規(guī)定了樣品前處理、色譜分離、質(zhì)譜檢測(cè)的基本要求。傳統(tǒng)檢測(cè)方法多依賴(lài)高效液相色譜（HPLC），但存在靈敏度不足、難以區(qū)分結(jié)構(gòu)相似藥物的問(wèn)題；而普通液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)雖能提升靈敏度，卻在分離效率與定量準(zhǔn)確性上存在優(yōu)化空間。
安益譜 Anyeep TQ9100 系統(tǒng)搭載超高效液相色譜模塊與三重四極桿質(zhì)譜模塊，可實(shí)現(xiàn)三種氯霉素藥物的快速分離與精準(zhǔn)定量。本次方法建立以 GB/T 22959-2008 為基礎(chǔ)，重點(diǎn)解決以下核心需求：一是通過(guò)超高效色譜柱縮短分離時(shí)間，提升批量樣品檢測(cè)效率；二是優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)，降低三種藥物的檢出限，滿(mǎn)足痕量殘留檢測(cè)需求；三是采用外標(biāo)法定量，確保結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)定量準(zhǔn)確性的要求，適用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)與監(jiān)管篩查。
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：參照標(biāo)準(zhǔn)的全流程優(yōu)化
（一）試劑與材料準(zhǔn)備
- 標(biāo)準(zhǔn)品：氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%）、甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%）、氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%），均購(gòu)自國(guó)家計(jì)量認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心，用于配制標(biāo)準(zhǔn)溶液與外標(biāo)法定量；
- 試劑：甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸銨（優(yōu)級(jí)純）、超純水（電阻率≥18.2 MΩ?cm），均符合 GB/T 22959-2008 對(duì)試劑純度的要求；
- 樣品：選取鰻魚(yú)、烤鰻樣品（購(gòu)自當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)），按標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行勻漿處理，用于方法驗(yàn)證；
- 耗材：0.22 μm 有機(jī)相濾膜、固相萃取柱（C18 柱，500 mg/6 mL，參照標(biāo)準(zhǔn)推薦型號(hào)）、離心管（50 mL，帶刻度）。
（二）樣品前處理：嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)流程
參照 GB/T 22959-2008 中樣品前處理步驟，結(jié)合 Anyeep TQ9100 系統(tǒng)對(duì)樣品純度的要求，優(yōu)化處理流程如下：
- 樣品提取：稱(chēng)取 5.00 g 勻漿樣品置于 50 mL 離心管中，加入 10 mL 乙腈，渦旋振蕩 2 min，超聲提取 15 min（功率 300 W，溫度 30℃），使藥物充分溶出；加入 5 g 無(wú)水硫酸鎂，渦旋 1 min 后，4000 r/min 離心 10 min，收集上層乙腈提取液；
- 凈化除雜：將提取液轉(zhuǎn)移至活化后的 C18 固相萃取柱（依次用 5 mL 甲醇、5 mL 超純水活化），以 1 mL/min 流速過(guò)柱，棄去初濾液；用 5 mL 5% 甲醇水溶液淋洗柱子，去除水溶性雜質(zhì)；最后用 5 mL 甲醇洗脫，收集洗脫液；
- 濃縮定容：將洗脫液置于 40℃氮吹儀中緩慢氮吹至近干，加入 1 mL 甲醇 - 水混合溶液（體積比 1:1，含 5 mmol/L 乙酸銨）溶解殘?jiān)?，渦旋混勻后過(guò) 0.22 μm 有機(jī)相濾膜，得到上機(jī)樣品溶液，待檢測(cè)。
該前處理流程既符合 GB/T 22959-2008 標(biāo)準(zhǔn)要求，又通過(guò)超聲提取增強(qiáng)藥物溶出效率，通過(guò)固相萃取去除樣品中的油脂、蛋白質(zhì)等基質(zhì)雜質(zhì)，避免對(duì)后續(xù)儀器檢測(cè)造成干擾。
三、儀器條件優(yōu)化：適配三種氯霉素藥物檢測(cè)
（一）超高效液相色譜（UPLC）條件設(shè)置
為實(shí)現(xiàn)三種氯霉素藥物的高效分離，參照 GB/T 22959-2008 色譜條件，結(jié)合 Anyeep TQ9100 超高效模塊性能，優(yōu)化參數(shù)如下：
- 色譜柱：安益譜 Ultra C18 超高效色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），該柱粒徑小、分離效率高，可縮短分析時(shí)間；
- 流動(dòng)相：A 相為 5 mmol/L 乙酸銨水溶液（含 0.1% 甲酸），B 相為甲醇；采用梯度洗脫程序（符合標(biāo)準(zhǔn)分離要求）：
0-2 min：B 相 30%→50%；2-5 min：B 相 50%→80%；5-7 min：B 相 80% 保持；7-7.1 min：B 相 80%→30%；7.1-10 min：B 相 30% 平衡；
- 流速：0.3 mL/min（超高效流速，兼顧分離效率與峰形）；
- 柱溫：35℃（恒定溫度確保保留時(shí)間穩(wěn)定）；
- 進(jìn)樣量：5 μL（減少樣品消耗，同時(shí)保證靈敏度）。
通過(guò)該色譜條件，三種氯霉素藥物可在 10 min 內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離，其中氯霉素保留時(shí)間約 3.2 min，甲砜霉素約 4.5 min，氟苯尼考約 5.8 min，無(wú)峰重疊現(xiàn)象，滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)對(duì)分離度的要求（分離度≥1.5）。
（二）三重四極桿質(zhì)譜（MS/MS）條件設(shè)置
參照 GB/T 22959-2008 質(zhì)譜參數(shù)，結(jié)合 Anyeep TQ9100 質(zhì)譜模塊的靈敏度優(yōu)勢(shì)，優(yōu)化多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式參數(shù)，確保三種藥物的特征離子精準(zhǔn)捕獲：
- 離子源：電噴霧電離源（ESI），正離子模式（氯霉素類(lèi)藥物在正離子模式下電離效率更高）；
- 離子源溫度：350℃；
- 噴霧電壓：4500 V；
- 鞘氣流量：10 L/min（氮?dú)?，純度?9.999%）；
- 輔助氣流量：5 L/min（氮?dú)猓?/span>
- 碰撞氣：氬氣（純度≥99.999%），碰撞氣壓力 0.2 Pa；
（三）外標(biāo)法定量：參照標(biāo)準(zhǔn)建立校準(zhǔn)體系
根據(jù) GB/T 22959-2008 對(duì)定量方法的要求，采用外標(biāo)法定量，具體步驟如下：
- 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：分別稱(chēng)取三種藥物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成 1000 μg/mL 的單標(biāo)儲(chǔ)備液；取適量單標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇 - 水混合溶液（體積比 1:1，含 5 mmol/L 乙酸銨）稀釋成濃度為 0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，覆蓋 GB/T 22959-2008 規(guī)定的限量范圍（鰻魚(yú)中氯霉素殘留限量為 0.3 μg/kg）；
- 校準(zhǔn)曲線繪制：將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液按上述儀器條件依次進(jìn)樣分析，以 “標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度” 為橫坐標(biāo)（x），“定量子離子峰面積” 為縱坐標(biāo)（y），采用最小二乘法擬合線性回歸方程，得到三種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
四、方法優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用價(jià)值
基于安益譜 Anyeep TQ9100 系統(tǒng)建立的三種氯霉素藥物檢測(cè)方法，相較于傳統(tǒng)方法及普通液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，具有顯著優(yōu)勢(shì)：
- 高效快速：借助超高效液相色譜模塊，將分析時(shí)間從 GB/T 22959-2008 推薦的 20 分鐘縮短至 10 分鐘，批量樣品檢測(cè)效率提升 50%，適合實(shí)驗(yàn)室日常大量樣品篩查；
- 靈敏度高：三重四極桿質(zhì)譜的 MRM 模式與優(yōu)化的電離參數(shù)，使三種藥物的 LOD 均≤0.05 μg/kg，可滿(mǎn)足更低濃度殘留的檢測(cè)需求，為風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警提供支撐；
- 操作簡(jiǎn)便：外標(biāo)法定量無(wú)需添加內(nèi)標(biāo)物，簡(jiǎn)化了標(biāo)準(zhǔn)溶液配制流程，且 Anyeep TQ9100 系統(tǒng)配套的工作站可自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算結(jié)果，降低操作難度；
- 兼容性強(qiáng)：該方法不僅適用于鰻魚(yú)、烤鰻等水產(chǎn)樣品，經(jīng)輕微調(diào)整前處理步驟后，還可應(yīng)用于雞肉、豬肉、牛奶等其他動(dòng)物源性食品，拓展了檢測(cè)范圍。
在實(shí)際應(yīng)用中，該方法可廣泛用于：
- 食品監(jiān)管部門(mén)抽檢：對(duì)市場(chǎng)流通的動(dòng)物源性食品進(jìn)行氯霉素類(lèi)藥物殘留篩查，打擊違法使用行為；
- 食品生產(chǎn)企業(yè)自檢：水產(chǎn)、畜禽養(yǎng)殖企業(yè)及食品加工廠對(duì)原料與成品進(jìn)行質(zhì)量控制，確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)要求；
- 第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)委托檢測(cè)：承接企業(yè)、科研單位的檢測(cè)委托，提供精準(zhǔn)的殘留量數(shù)據(jù)，助力產(chǎn)品合規(guī)上市。
結(jié)語(yǔ)
安益譜 Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，通過(guò)參照 GB/T 22959-2008 標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，采用外標(biāo)法定量，成功建立了同時(shí)檢測(cè)三種氯霉素藥物的高效、精準(zhǔn)分析方法。該方法不僅滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)性能的要求，更憑借儀器的超高效分離與高靈敏度檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，為動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留管控提供了可靠技術(shù)工具。未來(lái)，隨著食品質(zhì)量安全監(jiān)管的不斷升級(jí)，該方法將在保障公眾飲食安全、推動(dòng)行業(yè)合規(guī)發(fā)展中發(fā)揮重要作用，同時(shí)也為其他抗生素類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法的建立提供了參考范式。
